Elettroforesi delle proteine e immunofissazione

L’elettroforesi delle proteine può essere fatta su siero (la porzione liquida del sangue), su un campione di urina e su liquor. Un campione di sangue può essere prelevato da una vena del braccio. Il campione di urina può essere costituito da urina random (raccolto senza una tempistica precisa) o un campione di urina raccolta nell’arco delle 24 ore. Il campione di liquor viene raccolto mediante puntura lombare (inserendo un ago all’interno della cavità spinale, per aspirare il liquido cefalorachidiano).

No, non è necessaria alcuna preparazione.

L’elettroforesi delle proteine è usata per identificare la presenza di proteine anomale, per identificare l’assenza delle proteine normali e per determinare se un gruppo di proteine è presente in quantità minore o maggiore rispetto alla norma.

Le proteine hanno varie funzioni nell’organismo, includendo il trasporto di nutrienti, la rimozione delle tossine, il controllo dei processi metabolici e la difesa contro i microrganismi patogeni. L’elettroforesi delle proteine separa le proteine sulla base della loro massa e della loro carica elettrica. Ciò forma sul mezzo utilizzato per fare l’esame un tracciato caratteristico di cinque bande differenti per ampiezza e intensità, che riflette la tipologia e la quantità delle proteine presenti nel liquido in esame. Il tracciato si divide in cinque frazioni, chiamate albumina, alfa 1, alfa 2, beta e gamma. In alcuni casi, la frazione beta si divide ulteriormente in beta 1 e beta 2.

L’immunofissazione può essere utilizzata per identificare le bande anomale, in modo da determinare quale tipo di anticorpo (immunoglobulina ) sia presente in eccesso.

La maggior parte delle proteine plasmatiche e la loro funzione è tabulata nel proprio gruppo elettroforetico (la banda di cui fa parte). Vedere la tabella a fondo pagina.

L’alterazione del normale aspetto che deve avere un tracciato elettroforetico può aiutare a fare diagnosi di patologia. La presenza di un’anomalia sul tracciato delle proteine è raramente diagnostico di per sé, anche se fornisce indizi. Di solito vengono eseguiti altri esami come follow up, sulla base del quesito diagnostico, per identificare la natura della patologia sottostante.

I test di follow- up possono essere, ad esempio: albumina, catene libere leggere, immunoglobuline quantitative, alfa- 1 antitripsina e crioglobuline.

L’elettroforesi delle proteine può essere prescritta a seguito di risultati anomali di altri esami di laboratorio o come test iniziale per valutare i sintomi di un individuo. Una volta che la diagnosi è stata eseguita, l’elettroforesi può essere prescritta a intervalli regolari per monitorare il decorso della patologia e l’efficacia del trattamento. Alcuni esempi di momenti in cui l’elettroforesi può essere prescritta, sono elencati sotto.

L’elettroforesi del siero può essere eseguita:

• A seguito di risultati anomali di altri test di laboratorio: proteine totali e/o albumina o concentrazioni anomale di proteine urinarie, calcio alto, o globuli bianchi o rossi bassi
• Quando i sintomi suggeriscono una condizione infiammatoria, una patologia autoimmune, un’infezione acuta o cronica, una malattia renale o epatica, o una patologia con perdita di proteine
• Quando i sintomi, quali dolore osseo, anemia, affaticamento, fratture inspiegabili,  infezioni ricorrenti, fanno sospettare al medico un mieloma multiplo; per vedere quindi se sia presente il picco caratteristico che indica la presenza di un’immunoglobulina monoclonale nella regione beta o gamma; se è presente il picco, la presenza dell’immunoglobulina monoclonale è di solito confermata dall’immunofissazione.
• Per monitorare il trattamento del mieloma multiplo, per vedere se la banda monoclonale si è ridotta in quantità o se è scomparsa completamente col trattamento
   

L’elettroforesi delle proteine urinarie può essere prescritta:

• Quando la proteina è presente nell’urina a concentrazione più alta del normale per determinare la fonte di una concentrazione alta di proteine; può essere usata per determinare se le proteine fuoriescono dal plasma (suggerendo una funzionalità renale compromessa) o se provengono da una fonte differente (da plasmacellule tumorali come nel mieloma multiplo)
• Quando c’è il sospetto di mieloma multiplo, per determinare se alcune delle immunoglobuline monoclonali o dei frammenti di immunoglobuline monoclonali sono fuoriuscite nelle urine; se si osserva un picco che suggerisce la presenza di proteina monoclonale, la sua identità viene di solito definita  mediante immunofissazione.
   

L’elettroforesi delle proteine su liquor può essere prescritta:

• Per verificare se sia presente il bandeggio caratteristico della sclerosi multipla; la presenza di bande multiple distinte nel liquor (non presenti nel siero) si chiamano bande oligoclonali. La maggior parte delle persone affette da sclerosi multipla, o da altre patologie infiammatorie del sistema nervoso, presentano le bande oligoclonali.
• Per valutare i pazienti che lamentano mal di testa o sintomi neurologici, per verificare la presenza di proteine indicative di infiammazione o infezione
   

L’immunofissazione può essere prescritta quando:

• Una banda anomala sull’elettroforesi di siero o di urina, suggerisce la presenza di immunoglobuline monoclonali

L’elettroforesi delle proteine fornisce al clinico una stima approssimativa della quantità di proteine presenti per ogni frazione e rivela se siano presenti proteine anomale. L’immunofissazione serve per identificare la presenza di un particolare tipo di immunoglobulina. Il referto di laboratorio può includere una frase di commento come interpretazione del risultato.

Elettroforesi del siero

Alcune patologie o condizioni possono essere associate alla diminuzione o all’aumento di varie proteine del siero, come riportato sotto.

Elettroforesi urinaria

Normalmente c’è una piccolissima concentrazione di proteine nell’urina. Se c’è un significativo aumento di proteine, è imputabile ad uno dei seguenti quadri:

• Normalmente, i glomeruli prevengono il passaggio di proteine dal sangue all’urina. Quando i glomeruli sono danneggiati, l’albumina e le altre proteine plasmatiche possono passare questo filtro ed essere presenti nell’urina
• Normalmente, alcune piccole proteine passano attraverso i glomeruli ma vengono riassorbite dai tubuli. Quando i tubuli sono danneggiati, queste proteine compaiono nell’urina

• Alcune altre piccole proteine (catene libere leggere, mioglobina ed emoglobina) non sono fisiologicamente presenti nel sangue in grandi quantità. Quando sono presenti nel siero, passano attraverso i glomeruli e appaiono nell’urina.

Elettroforesi del liquor

• La presenza di bande multiple nella regione gamma (bande oligloclonali) che non sono presenti nel siero, è indicativa di sclerosi multipla
• La presenza di immunoglobuline policlonali (anticorpi prodotti e secreti da differenti plasmacellule) più alte del normale, suggerisce un’infezione
   

Immunofissazione

• Identifica il tipo di immunoglobulina presente nella banda monoclonale in un tracciato elettroforetico; l’immunofissazione determina la presenza di una catena pesante (IgG, IgM, o IgA) e di una catena leggera (kappa o lambda). Per maggiori informazioni, vedere il capitolo Domande frequenti, n.3.

Si, ogni volta che si desideri ottenere una separazione di molecole. L’elettroforesi del DNA, per esempio, è utilizzata per aiutare a studiare la composizione genetica di piante, animali ed umani.

Non necessariamente. La produzione di proteine monoclonali è molto spesso dovuta a una gammopatia monoclonale di incerto significato (MGUS). La maggior parte delle persone con MGUS hanno un decorso benigno, ma devono essere controllate in modo regolare con l’elettroforesi delle proteine su siero, o talvolta con il test delle catene leggere libere, in relazione al tipo di proteina monoclonale prodotta. Alcune di queste persone possono sviluppare mieloma multiplo dopo diversi anni.

Le immunoglobuline sono molecole composte da quattro catene proteiche: due identiche leggere, kappa o lambda, e due identiche pesanti di diverso tipo. Queste proteine sono prodotte dalle plasmacellule nel midollo osseo. Una particolare plasmacellula produce solo un tipo di immunoglobulina. Essa usa le catene proteiche come componenti da assemblare nelle immunoglobuline, gli anticorpi diretti contro specifiche minacce per l’organismo. Le catene utilizzate per formare le immunoglobuline sono chiamate “legate”. Normalmente c’è un piccolo eccesso di catene leggere kappa e lambda prodotte. Basse concentrazioni di queste catene libere leggere possono essere determinate nel sangue e nell’urina con un test apposito, e viene calcolato il rapporto kappa/lambda. Per maggiori informazioni, vedere la sezione Catene libere leggere.

Catene leggere libere e monoclonali che si trovano nell’urina.

E’ più comunemente chiamata uromodulina. E’ prodotta dai reni ed è fisiologicamente la proteina più abbondante nell’urina normale.