PML-RARA

Tramite un prelievo di sangue venoso dal braccio o un prelievo di midollo osseo ottenuto tramite aspirato midollare o biopsia osteo-midollare (BOM).

No, non è necessaria alcuna preparazione.

Questo test rileva la presenza del gene di fusione PML-RARA, ed è usato come sostegno alla diagnosi di leucemia promielocitica acuta (LAP). La presenza del gene di fusione PML-RARA nelle cellule leucemiche, è in grado di influenzare le scelte terapeutiche ma permette anche di monitorare l’efficacia della terapia e le eventuali ricadute.

Esistono metodi differenti per la rilevazione del gene PML-RARA che possono essere utilizzati per scopi differenti:

• Ibridazione in situ fluorescente (FISH); utile per la diagnosi di LAP e/o per determinare la percentuale di cellule nel midollo osseo contenenti il gene di fusione anomalo PML-RARA. Questo test utilizza sonde fluorescenti in grado di legarsi ed evidenziale i geni PML-RARA, se presenti. La metodica FISH può essere utilizzata anche per rilevare le traslocazioni varianti, ossia quelle che coinvolgono il gene RARA associato ad altri geni diversi da PML. Possono essere così identificate le LAP ATRA-resistenti.
• Test molecolari (realt-time PCR): richiesta per la diagnosi di APL. La real-time PCR per il gene PML-RARA è in grado di fornire un risultato quantitativo e quindi una stima del numero di sequenze geniche alterate nel campione di sangue o di midollo osseo di un paziente. Questo test viene di solito richiesto alla diagnosi proprio per ottenere un valore quantitativo di base, utile nel monitoraggio eseguito nel corso della terapia e anche per rilevare eventuali ricadute. Tuttavia questa metodica consente di rilevare solo il gene di fusione PML-RARA e non altre combinazioni di RARA con altri geni.
• Analisi cromosomica (analisi citogenetica standard): rileva alterazioni cromosomiche (traslocazioni, delezioni, diminuzione o aumento del numero) al fine di consentire la diagnosi di LAP. Questo test viene eseguito tramite analisi microscopica di un campione di sangue o di midollo osseo del paziente, alla ricerca di anomalie strutturali o numeriche, nello specifico, alla ricerca della traslocazione PML-RARA t(15;17). Questo metodo consente di identificare anche le anomalie rare pertanto è utile nel caso in cui gli altri metodi abbiano fornito un risultato negativo nonostante il forte sospetto di LAP persista.
   

Nel caso in cui vi sia un forte sospetto di leucemia e si stia cercando di confermare o escludere la diagnosi di LAP, insieme a questo esame, possono essere richiesti ulteriori test, tra i quali:

• Emocromo con formula: per valutare il numero ed il tipo di cellule ematiche presenti
• Striscio di sangue: valutazione microscopica delle cellule ematiche
• Immunofenotipo: classificazione delle cellule sulla base della presenza o assenza di determinati antigeni sulla superficie cellulare

Questo test viene richiesto in caso di sospetta LAP, come approfondimento diagnostico in seguito al riscontro di valori anomali al test dell’emocromo e/o allo striscio di sangue periferico, come aumento o diminuzione del numero dei leucociti, diminuzione delle piastrine, diminuzione dei globuli rossi, presenza di cellule anomale e immature come i promielociti, oltre alla presenza di sintomi aspecifici ma spesso associati a sindromi leucemiche come:

• Debolezza e astenia
• Pallore
• Inspiegabile perdita di peso
• Dolore articolare e osseo e/o splenomegalia
• Eventi emorragici, ecchimosi e alterazione della coagulazione sanguigna
   

Nelle fasi precoci spesso i pazienti affetti da LAP sono asintomatici. Con il passare del tempo le cellule normali presenti nel midollo osseo vengono spiazzate da quelle leucemiche. Di conseguenza possono insorgere sintomi come anemia, sanguinamento prolungato e infezioni ricorrenti. Le persone affette da LAP possono sviluppare anche la sindrome CID, coagulazione intravascolare disseminata, una condizione clinica potenzialmente letale. Dopo la diagnosi di LAP, viene richiesto il test PML-RARA al fine di classificare la patologia (ASTRA-resistente o ASTRA-sensibile) e per monitorare la risposta alla terapia e la comparsa di ricadute.

L’analisi citogenetica viene richiesta spesso nel caso in cui la sequenza genica anomala PML-RARA non venga rilevata e il clinico sospetti la presenza di un riarrangiamento genico riguardante il gene RARA e altri geni diversi da PML.

La presenza di promielociti anomali nel sangue e nel midollo osseo portatori della traslocazione PML-RARA, consente di formulare diagnosi di LAP.

La presenza traslocazione PML-RARA, classifica la patologia come ATRA-sensibile, ossia identifica i pazienti che possono trovare beneficio dal trattamento con il farmaco ATRA. Esiste infatti una piccola percentuale di pazienti affetti da LAP ma privi di questa alterazione genetica e che quindi non trovano benefici da questo approccio terapeutico basato sulla terapia genica.

Nel corso del monitoraggio del paziente, la diminuzione della quantità di PML-RARA nel sangue o nel midollo osseo, identifica i pazienti responsivi al trattamento. La diminuzione della quantità di PML-RARA al di sotto dei limiti di rilevabilità e il rientro dei valori dell’emocromo entro gli intervalli di riferimento, consente di classificare il paziente come “in remissione”. L’aumento invece identifica una progressione o una ricaduta della malattia.

I pazienti negativi per PML-RARA, non possono essere trattati con il farmaco ATRA e il test PML-RARA non può essere utilizzato nel monitoraggio.

Potrebbe essere richiesto il test per la rilevazione del gene di fusione BCR-ABL, associato ad altri cromosomi e a differenti tipi di leucemia, come la leucemia mieloide cronica e la leucemia linfoblastica acuta.

No, si tratta di un’alterazione acquisita e pertanto non ereditaria.

L’esecuzione del test è raccomandata solo in caso di sospetta LAP. La LAP è un sottotipo si leucemia mieloide acuta (LAM). La maggior parte delle persone affette da leucemia, non presentano la traslocazione PML-RARA.

Dipende dal laboratorio che esegue il test, che deve avere personale e strumentazioni specializzati. Per la consegna dei risultati potrebbero essere necessari alcuni giorni.